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            噬菌體篩選方法你知道嗎?

            發布時間:2021-12-28   點擊次數:731次
              噬菌體篩選是一項高通量地淘選具有特定結合能力的多肽或抗體的分子生物學技術,也是目前抗體藥篩選過程中使用非常廣泛的一種技術平臺。噬菌體展示技術可對人和其他動物的B細胞抗體庫進行體外建庫篩選,避開了免疫和細胞融合等步驟,從而縮短了實驗周期并降低了鼠源抗體的免疫原性。
              噬菌體篩選步驟:
              將經過誘變和加熱處理的生產菌株孢子或細胞懸浮液0.5ml涂布到生產菌株的平板培養基上,表面干燥后加入0.1ml保存的噬菌體原液,涂布均勻后置適溫下培養48~72h,觀察噬菌斑的形成并計數(如無噬菌體原液,也可用噬菌斑制成懸浮液)。將未經誘變但經加熱處理的生產菌株孢子或細胞懸浮液按上述步驟操作,觀察噬菌斑的形成并計數。將未經誘變和加熱處理的生產菌株孢子或細胞懸浮液按上述步驟操作,觀察噬菌斑的形成并計數。
              比較三者計數結果,確定噬菌體的加熱死亡率和誘變后的抗性率。鹽酸羥胺的后續處理鹽酸羥胺有促進溶原性噬菌體釋放的作用,因此可在以上育種步驟中增加鹽酸羥胺后續處理一步。將以上噬菌體抗性檢測活性高的抗性懸浮液分離到含鹽酸羥膠0.5%~5%的生產菌株平板分離培養基上,在適溫下培養48~96h至生成單菌落。
              將分離的單菌落制成細胞懸浮液,60~80℃下處理5~15min,在不含鹽酸羥胺的生產菌株平板分離培養基上進行二次分離。將二次分離得到的單菌落接種斜面,進行生產能力和抗性檢測。高產抗噬菌體菌株的的篩選按常規方法對抗性菌株進行搖瓶發酵試驗或其他方法生產能力檢測,篩選高產菌株。
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