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            抗CD44納米抗體制備與鑒定

            發布時間:2021-11-25   點擊次數:318次
              急性髓系白血?。ˋML)是一種異質性血液癌癥,目前主要的治療方法是化療和骨髓干細胞移植,但化療的特異性和配型的成功率均較低,因而患者的治愈者并不高?;诖?,已有對于AML治療的新型小分子靶向藥物和免疫靶向藥物的研究,可通過靶向AML細胞提高患者的治愈者和整體生存率。研究表明,CD44在AML細胞表面高表達,且參與AML干細胞的發生和發展,并已有靶向AML細胞表面分子CD44的治療性抗體的研究。但是,傳統單克隆抗體制備過程繁瑣,且人源化過程復雜,故難以將理論研究轉化到實際應用。因此,本課題選擇CD44作為靶標,并篩選易人源化的納米抗體,為進一步研制新一代治療AML的靶向性藥物奠定基礎。
              抗CD44納米抗體制備研究方法:
              1.CD44胞外結構域抗原的制備:構建CD44原核表達載體,轉化到大腸桿菌BL21菌株中,通過包涵體復性的方式制備抗原,并進行SDS-PAGE和ELISA分析。
              2.抗CD44納米抗體的噬菌體文庫構建:將表達的CD44抗原對健康雙峰駝進行免疫,通過細胞分離,總RNA提取以及PCR等方法將編碼納米抗體的核酸序列連接到噬菌體載體上,構建抗CD44納米抗體的噬菌體文庫。
              3.抗CD44納米抗體的篩選:利用噬菌體展示納米抗體和固相抗原的結合,通過數輪的“結合-洗脫-結合”后富集特異性結合的噬菌體,之后進行菌液ELISA和序列分析,從而獲得抗CD44的納米抗體。
              4.抗CD44納米抗體的表達純化以及特異性和活性的初步研究:構建抗CD44納米抗體的表達載體,轉化到大腸桿菌WK6菌株中,經過鎳親和層析和分子篩進行純化;通過ELISA方法對抗CD44納米抗體的特異性和活性進行初步鑒定。
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