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            納米抗體制備方法之噬菌體篩選技術

            發布時間:2021-10-25   點擊次數:447次
              納米抗體是在駱駝科及鯊魚科動物血清中大量存在的一種天然抗體,與常規單克隆抗體相比,納米抗體缺失輕鏈,其重鏈可變區VHH的CDR3區較長,是目前已知的可結合抗原的單位。特殊的結構特征和性質賦予了其一些其它常規抗體或抗體片段所不具有的特性。納米抗體(nanobodies,Nbs)因具有較小的相對分子質量,其*的分子結構使其適用于疾病診斷治療等諸多領域,當前得到了廣泛的關注。
              納米抗體制備方法之噬菌體篩選技術:
              噬菌體展示技術是一種由Simth于1985年建立的用于識別蛋白質和它相互作用蛋白的體外篩選技術。噬菌體展示的具體原理是將外源蛋白質的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白的一個基因上,使外源基因隨著外殼蛋白的表達而表達,蛋白以與外殼蛋白融合的形式展示在噬菌體表面。被展示的蛋白或者多肽可以保持相對的空間結構和生物活性,因而可以利用靶蛋白對其進行篩選。
              篩選的方法主要分為固相篩選和液相篩選兩種。通過生物淘洗法、競爭法、消減法、選擇性感染篩選、延遲性感染篩選等方法可以對和靶蛋白強力結合的基因片段篩選出來。具體地,篩選過程以靶蛋白為固定相,以噬菌體展示文庫為流動相,經過一段時間的共同孵育后,洗去未結合的游離噬菌體,然后以競爭受體或酸洗脫下與靶分子結合吸附的噬菌體,洗脫的噬菌體感染宿主細胞后經繁殖擴增,進行下一輪洗脫,經過3輪~5輪的“吸附-洗脫-擴增”后,即可得到與靶蛋白具有高親和性的抗體。經過篩選后,對篩選得到的蛋白進一步用酶聯免疫吸附測定或免疫印跡法對其進行特異性篩選,獲取目的克隆或鋪盤進行單克隆分離繼而進行大規模生產。
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