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            多克隆抗體制備實驗方法

            發布時間:2022-07-25   點擊次數:85次
              多克隆抗體制備主要是哺乳動物和禽類,如兔、綿羊、山羊、鼠、馬等。動物選擇根據抗體的用途和量來決定,也與抗原的性質有關。如需要大量的抗體,則用大動物;如要獲得直接標記診斷的抗體,則用本種動物;如要獲得間接標記診斷的抗體,則用異源動物;如抗原量少,且難獲得,則用純系小鼠;一般實驗室用抗體,多用兔或鼠。對于用于診斷的抗體,建議用動物通常選年輕、健康的雄性動物,懷孕的雌性動物一般不用于制備抗體。
             
              多克隆抗體制備實驗方法:
             
             ?、?抗原的制備
             
              抗原制備的主要目的在于在免疫動物體內產生強、適當的抗體。由于純化的抗原適合產生抗體,因此在注射前通常采用一些經典的方法,比如柱層析、分級萃取、亞細胞分離等進行抗原的分離和純化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中為可見的單一帶,抗原從凝膠中的抽提可作為純化的步驟。
             
             ?、?預放血
             
              輕輕的將兔子放在特制兔盒中,處于放松狀態的兔子采血會較容易。按壓兔子耳根部直至血管突出,然后將針頭插入耳部血管的中上部,觀察到進針后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。結束收集后,退出針頭并按壓傷處以制止血流,再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘以防止激活補體系統,再將試管在4°C 放置過夜使血液凝固。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落,將血液轉移至塑料離心管中,4°C,10,000g離心10分鐘,收集上清液在4°C保存。
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