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            單克隆抗體制備的基本方法

            發布時間:2022-06-23   點擊次數:108次
              抗體是機體在抗原刺激下產生的能與該抗原特異性結合的免疫球蛋白。常規的抗體制備是通過動物免疫并采集抗血清的方法產生的,因而抗血清通常含有針對其他無關抗原的抗體和血清中其他蛋白質成分。一般的抗原分子大多含有多個不同的抗原決定簇,所以常規抗體也是針對多個不同抗原決定簇抗體的混合物。即使是針對同一抗原決定簇的常規血清抗體,仍是由不同B細胞克隆產生的異質的抗體組成。
             
              單克隆抗體制備的基本方法:
              對抗原的要求是純度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原,可取1×107個細胞作腹腔免疫??扇苄钥乖杓油耆J献魟┎⒔洺浞秩榛?,如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原,可將抗原所在的電泳條帶切下,研磨后直接用以動物免疫。
              選擇與所用骨髓瘤細胞同源的BALB/c健康小鼠,鼠齡在8~12周,雌雄不限。為避免小鼠反應而不佳或免疫過程中死亡,可同時免疫3~4只小鼠。
              免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同,因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異,以獲得抗體為目的。免疫間隔一般2~3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高,融合后細胞產生特異抗體的可能性越大,而且單克隆抗體的質量(如抗體的濃度和親和力)也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關。末次免疫后3~4天,分離脾細胞融合。
             
              在體外培養條件下,細胞的生長依賴適當的細胞密度,因而,在培養融合細胞或細胞克隆化培養時,還需加入其他飼養細胞(feedercell)。常用的飼養細胞為小鼠的腹腔細胞,制備方法為用冷凍果糖液注入小鼠腹腔,輕揉腹部數次,吸出后的液體中即含小鼠腹腔細胞,其中在巨噬細胞和其他細胞。亦有用小鼠的脾細胞、大鼠或豚鼠的腹腔細胞作為飼養細胞的。在制備飼養細胞時,切忌針頭刺破動物的消化器官,否則所獲細胞會有嚴重污染。飼養細胞調至1×105/ml,提前一天或當天置板孔中培養。
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